Caracterización de los antígenos específicos del neutrófilo NA1, NA2 y SH en la población argentina / Characterization of neutrophil-specific antigens NA1, NA2 and SH in the argentinean population

Los antígenos especifícos de neutrófilos NA1 (HNA-1a), NA2 (HNA-1b) y SH (HNA-1c) son formas alotípicas del Fc gamma RIIIb y los blancos más frecuentes de los aloanticuerpos antigranulocitarios. El objetivo de este estudio fue determinar las frecuencias alélicas de los antígenos específicos de neutrófilos pertenecientes al sistema HNA-1 en donantes de sangre y amerindios de la etnia Toba de la ciudad de Rosario, Argentina. Se genotipificaron doscientos dieciocho individuos no relacionados para HNA-1a, HNA-1b y HNA-1c mediante reacción en cadena de polimerasa con cebadores secuencia específica (PCR-SSP). Las frecuencias alélicas en los donantes de sangre para HNA-1a y HNA-1b fueron 0,44 y 0,56 respectivamente y en la población amerindia Toba fueron 0,77 y 0,23 respectivamente. El alelo HNA-1c presentó una frecuencia de 0,023 en los donantes de sangre, pero no se detectó en ninguno de los individuos amerindios estudiados. Los presentes datos mostraron que las frecuencias de los alelos que codifican al sistema HNA-1 en la población mayoritaria de Rosario y en la minoritaria amerindia Toba son similares a las descriptas en europeos y otras poblaciones amerindias distantes, respectivamente.

The neutrophil-specific antigens NA1 (HNA-1a), NA2 (HNA-1b) and SH (HNA-1c) are allotypic forms of Fc gamma RIIIb and the most frequent targets of neutrophil alloantibodies. The aim of this study was to determine to gene frequencies of the neutrophil-specific antigens bolonging to the HNA-1 system in blood donors and Toba amerindians fron Rosario, Argentina. Two hundred and eighteen unrelated individual from Rosario were typed for HNA-1a, HNA-1b and HNA-1c, using polymerase chain reaction with sequence-specific primers (PCR-SSP). For the argentinean blood donors, the HNA-1a and HNA-1b gene frequencies were 0.44 and 0.56 and for the amerindians Toba were 0.77 and 0.23 respectively. The HNA-1c gene frequency in blood donors was 0.023 but the allele was absent within the amerindian individuals. The present data showed that the HNA-1 allele frequencies in the major population and the Toba amerindian from Rosario are similar to those described in European and others distant amerindians populations, respectively.

Caracterización de los antígenos específicos del neutrófilo NA1, NA2 y SH en la población argentina / Characterization of neutrophil-specific antigens NA1, NA2 and SH in the argentinean population

Los antígenos especifícos de neutrófilos NA1 (HNA-1a), NA2 (HNA-1b) y SH (HNA-1c) son formas alotípicas del Fc gamma RIIIb y los blancos más frecuentes de los aloanticuerpos antigranulocitarios. El objetivo de este estudio fue determinar las frecuencias alélicas de los antígenos específicos de neutrófilos pertenecientes al sistema HNA-1 en donantes de sangre y amerindios de la etnia Toba de la ciudad de Rosario, Argentina. Se genotipificaron doscientos dieciocho individuos no relacionados para HNA-1a, HNA-1b y HNA-1c mediante reacción en cadena de polimerasa con cebadores secuencia específica (PCR-SSP). Las frecuencias alélicas en los donantes de sangre para HNA-1a y HNA-1b fueron 0,44 y 0,56 respectivamente y en la población amerindia Toba fueron 0,77 y 0,23 respectivamente. El alelo HNA-1c presentó una frecuencia de 0,023 en los donantes de sangre, pero no se detectó en ninguno de los individuos amerindios estudiados. Los presentes datos mostraron que las frecuencias de los alelos que codifican al sistema HNA-1 en la población mayoritaria de Rosario y en la minoritaria amerindia Toba son similares a las descriptas en europeos y otras poblaciones amerindias distantes, respectivamente. (AU)

The neutrophil-specific antigens NA1 (HNA-1a), NA2 (HNA-1b) and SH (HNA-1c) are allotypic forms of Fc gamma RIIIb and the most frequent targets of neutrophil alloantibodies. The aim of this study was to determine to gene frequencies of the neutrophil-specific antigens bolonging to the HNA-1 system in blood donors and Toba amerindians fron Rosario, Argentina. Two hundred and eighteen unrelated individual from Rosario were typed for HNA-1a, HNA-1b and HNA-1c, using polymerase chain reaction with sequence-specific primers (PCR-SSP). For the argentinean blood donors, the HNA-1a and HNA-1b gene frequencies were 0.44 and 0.56 and for the amerindians Toba were 0.77 and 0.23 respectively. The HNA-1c gene frequency in blood donors was 0.023 but the allele was absent within the amerindian individuals. The present data showed that the HNA-1 allele frequencies in the major population and the Toba amerindian from Rosario are similar to those described in European and others distant amerindians populations, respectively. (AU)

Implementación de un método in house para el tamizaje de los Virus de la Hepatitis C e Inmunodeficiencia Humana en donantes de sangre: resultados / Implementation of an in-house method for screening for Hepatitis C and Human Immunodeficiency Virus in blood donors: results

La implementación de técnicas de amplificación de ácidos nucleicos (NAT) para la detección de Virus de Hepatitis C (VHC) y Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) en el tamizaje de donantes de sangre permite acortar los períodos ventana para los ensayos utilizados en la detección de antígenos y/o anticuerpos, identificando donaciones infectivas y evitando su transfusión. Todos los usuarios de NAT deben proceder a su validación para investigar si los procedimientos involucrados cumplen y garantizan confiabilidad en la reducción del período ventana en unidades de hemocomponentes factibles de ser transfundidas. El objetivo de este trabajo fue mostrar los resultados obtenidos de la implementación de técnica NAT in house validadas frente a estándares internacionales para la detección de VHC y VIH en donantes de sangre. Los resultados fueron analizados con el software Probit analysis programs. Para un 95% de positividad, el límite de detección fue de 98,50 Ul/ml para VHC y 294, 84 Ul/ml para VIH. La especificidad fue del 100% y los procedimientos presentaron robustez. La validación de técnicas de PCR in house permite demostrar que, por sensibilidad y especificidad, son una alternativa válida y aplicable en el tamizaje de donantes de sangre.

The technical implementation of nucleic acid amplification (NAT) for detecting hepatitis C virus (HCV) and Human Immunodeficiency Virus (HIV) in blood donors screening can shorten the window periods of tests used in the detection antigen and/or antibodies, identifying and preventing infectious donations transfusion. All users of NAT should proceed to validation to investigate whether the procedures involved meet and ensure reliability in reducing the window period in units of transfused blood products to be feasible. The aim of this study was to report the results of the technical implementation of NAT in-house validated against international standards for the detection of HCV and HIV genomes in blood donors. The results were analyzed using Probit analysis software programs. For a 95% positivity, the detection limit was 98.50 IU/ml for HCV and 294. 84 IU/ml for HIV. The specificity was 100% and showed robust procedures. Validation of in-house PCR techniques can demonstrate that for sensitivity and specificity, are a valid and applicable in screening blood donors.

Un caso de grupo sanguíneo raro: fenotipo p / A rare blood group: p phenotype

Un individuo con un fenotipo eritrocitario raro carece de uno o varios antígenos presentes en la mayor parte de la población de pertenencia. Cuando presenta el anticuerpo correspondiente, se pueden producir complicaciones perinatales, transfusionales y/o transplantológicas. Se presenta el caso de una embarazada aloinmunizada derivada a nuestro servicio en la semana 12 de su tercera gesta para su evaluación y seguimiento. El diagnóstico inmunohematológico le asignó el excepcional fenotipo "p" (aproximadamente 1/200 000 individuos), asociado con una mayor tasa de abortos espontáneos y a reacciones transfusionales graves cuando se transfunden unidades incompatibles. El estudio del gen A4GALT demostró la presencia de la mutación c.752C > T en doble dosis. Esta mutación lleva a un cambio de una prolina por una leucina en el residuo 251 de la 4-α-galactosiltransferasa. Por parto inducido por sufrimiento fetal, nace a las 36 semanas una bebé con prueba de antiglobulina (Coombs) directa negativa, eluido reactivo, con ictericia que requirió luminoterapia. Una semana después el neonato fue externado sin secuelas aparentes. Posteriormente, a raíz de una cirugía inminente y la improbabilidad de encontrar sangre compatible, se elaboró un plan para cubrir las posibles demandas. Este caso pone en evidencia la necesidad de contar a nivel nacional con un laboratorio de referencia de inmunohematología y un banco de sangre de grupos raros, que permita resolver con celeridad situaciones que requieran transfundir a estos individuos.

A rare blood group is usually defined as the absence of a high prevalence antigen or the absence of several antigens within a single blood group system. These individuals may develop clinically significant red cell antibodies to the high incidence red cell antigens they lack. A 33-year-old alloimmunized woman was referred to our center at the 12th week of her third pregnancy for evaluation and follow up. The laboratory work-up grouped her as belonging to "p" phenotype, associated with difficulties to find compatible blood for transfusion and a high incidence of recurrent miscarriage. At 36 weeks, a baby girl was born by induced labor due to fetal suffering. With a negative direct antiglobulin test but a positive elution test, she was in the neonatology ward for one week receiving luminotherapy. Homozygosity for a missense mutation at position 752 (c.752C > T) in the A4GALT gene was found to be responsible for the p phenotype. This mutation changes a proline to a leucine at codon 251 of the 4-α-galactosyltransferase. Recently, due to an imminent chirurgical intervention and the impossibility to have compatible blood available for transfusion, an autologous donation plan was designed to satisfy probable demand. This case showed the need for blood bank facilities capable to respond satisfactorily to these situations in Argentina. This would facilitate the storage of cryopreserved blood from individuals with rare blood groups for homologous use or to develop rare blood donors programs.

[A rare blood group: p phenotype]. / Un caso de grupo sanguíneo raro: fenotipo p.

A rare blood group is usually defined as the absence of a high prevalence antigen or the absence of several antigens within a single blood group system. These individuals may develop clinically significant red cell antibodies to the high incidence red cell antigens they lack. A 33-year-old alloimmunized woman was referred to our center at the 12th week of her third pregnancy for evaluation and follow up. The laboratory work-up grouped her as belonging to "p" phenotype, associated with difficulties to find compatible blood for transfusion and a high incidence of recurrent miscarriage. At 36 weeks, a baby girl was born by induced labor due to fetal suffering. With a negative direct antiglobulin test but a positive elution test, she was in the neonatology ward for one week receiving luminotherapy. Homozygosity for a missense mutation at position 752 (c.752C > T) in the A4GALT gene was found to be responsible for the p phenotype. This mutation changes a proline to a leucine at codon 251 of the 4-?-galactosyltransferase. Recently, due to an imminent chirurgical intervention and the impossibility to have compatible blood available for transfusion, an autologous donation plan was designed to satisfy probable demand. This case showed the need for blood bank facilities capable to respond satisfactorily to these situations in Argentina. This would facilitate the storage of cryopreserved blood from individuals with rare blood groups for homologous use or to develop rare blood donors programs.

Microsatellite instability analysis in hereditary non-polyposis colon cancer using the Bethesda consensus panel of microsatellite markers in the absence of proband normal tissue.

BACKGROUND: Hereditary non-polyposis colon cancer (HNPCC) is an autosomal dominant syndrome predisposing to the early development of various cancers including those of colon, rectum, endometrium, ovarium, small bowel, stomach and urinary tract. HNPCC is caused by germline mutations in the DNA mismatch repair genes, mostly hMSH2 or hMLH1. In this study, we report the analysis for genetic counseling of three first-degree relatives (the mother and two sisters) of a male who died of colorectal adenocarcinoma at the age of 23. The family fulfilled strict Amsterdam-I criteria (AC-I) with the presence of extracolonic tumors in the extended pedigree. We overcame the difficulty of having a proband post-mortem non-tumor tissue sample for MSI testing by studying the alleles carried by his progenitors. METHODS: Tumor MSI testing is described as initial screening in both primary and metastasis tumor tissue blocks, using the reference panel of 5 microsatellite markers standardized by the National Cancer Institute (NCI) for the screening of HNPCC (BAT-25, BAT-26, D2S123, D5S346 and D17S250). Subsequent mutation analysis of the hMLH1 and hMSH2 genes was performed. RESULTS: Three of five microsatellite markers (BAT-25, BAT-26 and D5S346) presented different alleles in the proband's tumor as compared to those inherited from his parents. The tumor was classified as high frequency microsatellite instability (MSI-H). We identified in the HNPCC family a novel germline missense (c.1864C>A) mutation in exon 12 of hMSH2 gene, leading to a proline 622 to threonine (p.Pro622Thr) amino acid substitution. CONCLUSION: This approach allowed us to establish the tumor MSI status using the NCI recommended panel in the absence of proband's non-tumor tissue and before sequencing the obligate carrier. According to the Human Gene Mutation Database (HGMD) and the International Society for Gastrointestinal Hereditary Tumors (InSiGHT) Database this is the first report of this mutation.

Capacidad fecundante espermática luego de la recuperación de espermatozoides mediante la técnica de Swim-up / Spermatic fertilization capacity after swin-up spermatozoa recovery technique

OBJETIVO: Evaluar en pacientes infértiles, la calidad espermática pre y post swim up y compararlacon una población de hombres fértiles.MÉTODOS: De 55 pacientes que asistieron al Servicio de Reproducción del Hospital Centenario de Rosario a los que se efectuó espermograma y estudios funcionales espermáticos según normas OMS (1999), se seleccionaron30 muestras de semen con volumen mayor de 1.0 ml, concentración de espermatozoides mayor de 5.000.000/ml y que no presentaban hiperviscosidad. Se compararon los resultados obtenidos de: movilidad progresiva (MP), morfología (M), condensación de la cromatina (CC) e integridad de la cromatina (IC), en el semen fresco sin tratar (G2) y luego del swim-up (G3), con los valores obtenidos en muestras de semen frescode 15 hombres fértiles (G1). Se utilizó microscopio óptico para estudiar la movilidad espermática progresiva,tinción Hematoxilina-Verde Brillante para analizar la morfología, azul de anilina para evaluar la condensaciónde la cromatina y el fluorocromo naranja de acridina para analizar la integridad de la cromatina. La técnica de recuperación espermática utilizada fue el swim-up, que se realizó en medio HTF, incubando en tubo Falcon a 45 ° en estufa de 37 °C gaseada (atmósfera de CO2 5%) durante 1 hora. Luego se tomaronde la capa superior los espermatozoides que sobrenadaron,en los que se efectuaron las prácticas post swim-up. Se aplicó la prueba t - Student a los valores de los parámetros MP, M, CC e IC en los 3 grupos de pacientes, observándose diferencia significativa para los cuatro parámetros al comparar G1 vs. G2 y G2 vs. G3 (p0.1), lo cual indica que los parámetros estudiados MP, M, CC e IC, en los espermatozoidesrecuperados del swim-up, son semejantes a la población de hombres fértiles.RESULTADOS: Estos resultados muestran que mediante swim-up se pueden recuperar gametas con capacidad fecundante potencial semejante a la población fértil, para aplicar en técnicas de reproducción asistida de baja complejidad, como la inseminación intrauterina, donde la selección natural es aún viable

OBJECTIVES: To investigate sperm quality before and after swim up in infertile patients, and to compare it with a fertile men population. METHODS: Semen samples from 55 patients consulting at the infertility services of the Hospitals “Centenario” in Rosario and “Eva Perón” in Gro Baigorria were collected and analyzed accordingly with the WHO guidelines. 30 sperm samples with a volume higher than 1.0 ml, and spermatozoid concentration higher than 5.000.000/ml, not presenting hyperviscosity were selected. Outcome variables including progressive mobility (PM), morphology (M), chromatin condensation (CC) and chromatin integrity (CI), were compared in fresh semen samples, between patients without previous treatment (G2) and after swim up (G3) and 15 fertile men (G1). Sperm morphology was evaluated by brilliant green hematoxyllin stain ;progressive mobility with a subjective method accordingly to WHO (1999); chromatin condensation with aniline blue test; and chromatin integrity with acridine orange as fluorocrom. Swim up technique was based on Berger et al. (1985) with mHTF, heatingthe samples in a Falcon tube in a 45º angle in a 37ºC gas heater for one hour (5% C02 atmosphere). Following incubation 0.5 ml of the overlay containing sperm cells that swam up from the pellet were removed to process the recovered spermatozoids. Student’s t test was applied to compare PM, M, CC, and CI between the four groups. A significant difference was found between G1 vs G3 and G2 vs G3 (p 0.1). It showed that PM, M, CC and CI parameters in the recovered spermatozoids after swim up were similar to fertile population. CONCLUSIONS: Our results indicate that through the swim up procedure gametes with fertile ability similar to normal fertile population can be recovered to be applied in low complexity in vitro fertilization techniques such as intrauterine insemination, where the natural selection is still viable

[Spermatic fertilization capacity after swim-up spermatozoa recovery technique]. / Capacidad fecundante espermática luego de la recuperación de espermatozoides mediante la técnica de swim-up.

OBJECTIVES: To investigate sperm quality before and after swim up in infertile patients, and to compare it with a fertile men population. METHODS: Semen samples from 55 patients consulting at the infertility services of the Hospitals "Centenario" in Rosario and "Eva Perón" in Gro Baigorria were collected and analyzed accordingly with the WHO guidelines. 30 sperm samples with a volume higher than 1.0 ml, and spermatozoid concentration higher than 5,000,000/ml, not presenting hyperviscosity were selected. Outcome variables including progressive mobility (PM), morphology (M), chromatin condensation (CC) and chromatin integrity (CIl, were compared in fresh semen samples, between patients without previous treatment (G2) and after swim up (G3) and 15 fertile men (G1). Sperm morphology was evaluated by brilliant green hematoxyllin stain; progressive mobility with a subjective method accordingly to WHO (1999); chromatin condensation with aniline blue test; and chromatin integrity with acridine orange as fluorocrom. Swim up technique was based on Berger et al. ( 1985) with mHTF, heatingthe samples in a Falcon tube in a 45 degree angle in a 37 degree C gas heater for one hour (5% CO2 atmosphere). Following incubation 0.5 ml of the overlay containing sperm cells that swam up from the pellet were removed to process the recovered spermatozoids. Student's t test was applied to compare PM, M, CC, and CI between the four groups. A significant difference was found between G1 vs G3 and G2 vs G3 (p < 0.001). No significant differences were found between G1 and G3 (p > 0.1). It showed that PM, M, CC and C1 parameters in the recovered spermatozoids after swim up were similar to fertile population. CONCLUSIONS: Our results indicate that through the swim up procedure gametes with fertile ability similar to normal fertile population can be recovered to be applied in low complexity in vitro fertilization techniques such as intrauterine insemination, where the natural selection is still viable.

[Modified sperm stress test. Immune response and functionality of the human spermatozoid membrane]. / Estrés espermático modificado. Respuesta inmune y funcionalidad de la membrana del espermatozoide humano.

OBJECTIVE: Our purpose was to study, in semen samples of infertile patients, the relationship between the Modified Sperm Stress Test (MOST) and the presence of antisperm antibodies (ASA), macrophages concentration and the Hypoosmotic Swelling Test (HOST). METHODS: Semen samples from 42 men undergoing evaluation for infertility were examined according to WHO criteria. Twenty-five of them, whithout clumping non hyperviscosity, were selected. The MOST test was applied according to the author's original technique. ASA were determined with a direct mixed agglutination test, TAC II, developed and validate by our group. Macrophage concentration was evaluated with Neutral Red stain, and functional integrity of the sperm membrane with the Hypoosmotic Swelling Test using an hypoosmotic solution of 150 mOm/ml composed of equal parts of fructose and sodium citrate. RESULTS: The Chi square test was applied to the observational data obtaining the following results: There was a statistically significant association between the presence of ASA and altered MOST (p<0.001). In all samples with ASA, abnormal MOST values were obtained (MOST<0.39). Besides, there is a statistically significant association exists between the increased concentration of macrophages and abnormal MOST (p<0.01); and altered HOST was positively correlated with abnormal MOST (p<0.02). CONCLUSION: Results clearly demonstrate the high predictive power of MOST like a test of sperm resistance to the forced lipoperoxidation, offering conditions to become a good predictor of sperm performance. Understanding the sperm resistance to the ROS and their harmfull effects on the sperm functions, a proportion of infertile men can be succesfully treated.

Estrés espermático modificado. Respuesta inmune y funcionalidad de la membrana del espermatozoide humano / Modified sperm stress test. Immune response and functionality of the human spermatozoid membrane

OBJETIVO: Nos propusimos estudiar, en muestras de semen de pacientes infértiles, la probable asociación del Test de Estrés Espermático Modificado (MOST) con la presencia de anticuerpos antiespermáticos (AAE), concentración de macrófagos y test Hiposmótico (THO). MÉTODOS: Se trabajó con 42 muestras de semen de pacientes infértiles a las que se efectuó espermograma según normas OMS. De ellas se seleccionaron 25 que no presentaron agrumación ni hiperviscosidad. Se aplicó el test MOST según la técnica original del autor. Los AAE se determinaron aplicando un test directo de aglutinación mixta TAC II, validado frente a Mar Screen (Fertility Technologies U.S.A. Los macrófagos se investigaron con tinción Rojo Neutro, y la funcionalidad de la membrana espermática con el test Hiposmótico, incu bando los espermatozoides en solución de 150 mOsm/ml compuesta por solución de Frutosa y Citrato de sodio. RESULTADOS: Se aplicó el test Chi cuadrado a los datos observacionales obteniendo los siguientes resultados: Existe asociación estadísticamente significativa entre la presencia de AAE y estrés espermático o MOST alterados (p<0.001). En todas las muestras que presentaban AAE, se obtuvieron valores del MOST anormal ( MOST<0.39).Se halló asociación estadísticamente significativa entre concentración aumentada de macrófagos y MOST anormal (p<0.01); también existe asociación entre THO alterados y MOST anormal (p<0.02). CONCLUSIÓN: El MOST como prueba de resistencia espermática a la lipoperoxidación forzada, reúne condiciones suficientes como para convertirse en un test predictor de fertilidad. Además el poder evaluar la resistencia espermática a las ROS y conocer sus efectos deletéreos sobre la función espermática, permite tomar medidas correctivas pertinentes (AU)

[Macrophages in human semen]. / Macrófagos en semen humano.

OBJECTIVES: To investigate the presence of macrophages in human semen samples and the function they carry out in the seminal fluid. Their presence was studied in relation to spermatic morphology, percentage of spermatozoids with native DNA, and presence of antispermatic antibodies. METHODS AND RESULTS: The work was performed with semen samples from 31 unfertile males from 63 couples in which the "female factor" was ruled out as the cause of infertility. Sperm study according to WHO (1992) was carried out in all samples, in addition to: DNA study with acridine orange as fluorocrom, macrophage concentration by neutral red in a Neubauer camera, and detection of antispermatic antibodies with a mixed agglutination test (TAC II) (validated with Mar Screen-Fertility technologies). Sperm morphology was evaluated by Papanicolaou test. 19/31 selected sperm samples (61.3%) showed increased concentration of macrophages, 13 of them (41.9%) with denaturalized DNA, and 8 (25.8%) abnormal morphology. Six samples showed increased macrophage concentration and predominance of native DNA, whereas 11 samples showed increased macrophages and abnormal morphology. Among 18 (58.1%) samples showing antispermatic antibodies 14 (77.7%) had an increased concentration of macrophages. Statistical analysis resulted in a high correlation between macrophage concentration and increased percentage of spermatozoids with denaturalized DNA (p < 0.05). An increased concentration of macrophages is associated with the presence of antispermatic antibodies (p < 0.05). There was not evidence of significant association between concentration of macrophages and percentage of morphologically normal spermatozoids (p < 0.05). CONCLUSIONS: We can conclude that macrophages are present in human semen and participate in immunovigilance contributing to improve the seminal quality.

Macrófagos en semen humano / Macrophages in human semen

OBJETIVO: Nuestro objetivo fue investigar la presencia de macrófagos en muestras de semen humano y la función que los mismos desempeñan en el fluido seminal. Para ello se los relacionó con morfología espermática, porcentaje de espermatozoides con ADN nativo y presencia de anticuerpos antiespermáticos (AAE). MÉTODO Y RESULTADOS: Se trabajó con muestras de semen de 31 hombres infértiles provenientes de 63 parejas en las que se descartó el "factor femenino" como causa de infertilidad. En todas ellas se efectuó espermograma según normas O.M.S., además de: estudio del ADN con Naranja de Acridina como fluorocromo; la concentración de macrófagos que se realizó con Rojo Neutro en cámara de Neubauer y la investigación de anticuerpos antiespermáticos con el test de aglutinación mixta TAC II (Validado frente a Mar Screen- Fertility Technologies). Para evaluar la morfología espermática se utilizó tinción Papanicolaou. De las 31 muestras de semen seleccionadas en 19 (61,3 por ciento) se observó concentración aumentada de macrófagos, de las cuales 13 (41,9 por ciento) presentaban ADN desnaturalizado y 8 (25,8 por ciento) morfología anormal. Seis de las muestras presentaron concentración de macrófagos aumentados y predominio de ADN nativo, mientras que once tenían macrófagos aumentados y morfología alterada . De las 18 (58,1 por ciento) muestras que presentaban AAE hubo 14 (77,7 por ciento) con concentración de macrófagos aumentada. De los estudios estadísticos realizados surge que, la concentración de macrófagos está altamente correlacionada con un aumento del porcentaje de espermatozoides con ADN desnaturalizado (p<0,05). La concentración aumentada de macrófagos está asociada a la presencia de AAE. (p<0,05). No se encontró asociación significativa entre la concentración de macrófagos y el porcentaje de espermatozoides morfológicamente normales (p<0,5). CONCLUSION: Podemos concluir que los macrófagos están presentes en el semen humano y participan en la inmunovigilancia contribuyendo a mejorar la calidad seminal (AU)

Parámetros séricos del metabolismo del hierro en mieloma múltiple / Serum iron parameters in multiple myeloma

Las células normales y neoplásicas tienen similares necesidades de hierro, pero las últimas pueden exhibir mecanismos alterados de adquisición y secuestro del metal que les permiten continuar multiplicándose en tejidos del huésped, aun en condiciones de restricción del nutriente. El presente trabajo tuvo como objetivo investigar los parámetros séricos del metabolismo del hierro en pacientes con Mieloma Múltiple (MM), y compararlos con los correspondientes a una población normal. En 48 pacientes con el cáncer hematolègico se determinó Hierro (µ/dl) e Indice de Saturación de la Transferrina (por ciento) por métodos colorimétricos, Ferritina (ng/ml) por IRMA y Transferrina (mg/dl) por inmunodifusión radial. El grupo control estuvo constituido por 40 individuos sanos, correspondientes en edad y sexo. En el grupo pacientes se encontraron valores significativamente elevados (P<0,00001) de Ferritina sérica (x=504,6 ng/ml ± 386,2) y de Indice de Saturación de la Transferrina (x=45 por ciento ± 14,9) comparados con los controles (x=86,7 ng/ml ± 30 y x=29,9 ng/ml ± 8,36, respectivamente). Niveles significativamente más bajos de Transferrina sérica (P<0,00001) se observaron en el grupo pacientes (x=270 mg/dl ± 102,1) respecto a los controles (x=360 mg/dl ± 57,3).No hubo diferencias significativas (P=0,8189) entre la Ferremia del grupo pacientes (x=100,85 µg/dl ± 56,2) y los controles (x=98,6 µg/dl ± 32,4). Los resultados obtenidos mostraron un metabolismo del hierro aberrante en MM, que podría favorecer el crecimiento celular maligno y la susceptibilidad a infecciones, e inhibir funciones inmunes

Parámetros séricos del metabolismo del hierro en mieloma múltiple / Serum iron parameters in multiple myeloma

Las células normales y neoplásicas tienen similares necesidades de hierro, pero las últimas pueden exhibir mecanismos alterados de adquisición y secuestro del metal que les permiten continuar multiplicándose en tejidos del huésped, aun en condiciones de restricción del nutriente. El presente trabajo tuvo como objetivo investigar los parámetros séricos del metabolismo del hierro en pacientes con Mieloma Múltiple (MM), y compararlos con los correspondientes a una población normal. En 48 pacientes con el cáncer hematolÞgico se determinó Hierro (A/dl) e Indice de Saturación de la Transferrina (por ciento) por métodos colorimétricos, Ferritina (ng/ml) por IRMA y Transferrina (mg/dl) por inmunodifusión radial. El grupo control estuvo constituido por 40 individuos sanos, correspondientes en edad y sexo. En el grupo pacientes se encontraron valores significativamente elevados (P<0,00001) de Ferritina sérica (x=504,6 ng/ml ± 386,2) y de Indice de Saturación de la Transferrina (x=45 por ciento ± 14,9) comparados con los controles (x=86,7 ng/ml ± 30 y x=29,9 ng/ml ± 8,36, respectivamente). Niveles significativamente más bajos de Transferrina sérica (P<0,00001) se observaron en el grupo pacientes (x=270 mg/dl ± 102,1) respecto a los controles (x=360 mg/dl ± 57,3).No hubo diferencias significativas (P=0,8189) entre la Ferremia del grupo pacientes (x=100,85 Ag/dl ± 56,2) y los controles (x=98,6 Ag/dl ± 32,4). Los resultados obtenidos mostraron un metabolismo del hierro aberrante en MM, que podría favorecer el crecimiento celular maligno y la susceptibilidad a infecciones, e inhibir funciones inmunes (AU)

Inmunología y deterioro de parámetros seminales en varicocele / Immunology and deterioration of sperm parameters in varicocele

OBJETIVO: Investigar la presencia de autoanticuerpos antiespermatozoides (AAE) y su correlación con parámetros seminales en pacientes con varicocele. MÉTODOS: Se estudiaron 137 hombres jóvenes (15-35 años), con varicocele unilateral izquierdo sin cirugía previa, que consultaron en los Servicios de Reproducción y Urología de los Hospitales Eva Perón y Provincial del Centenario, ambos Hospitales Escuela de la Universidad Nacional de Rosario. Se efectuó espermograma según normas OMS, y se determinaron los AAE con TAC II. RESULTADOS: La motilidad estuvo alterada en un 67,2 por ciento (p< 0,001). La morfología resultó anormal en el 97,1 por ciento (p< 0,001). La concentración de espermatozoides estuvo disminuida en el 19,7 por ciento de los pacientes, pero no difiere significativamente de los valores hallados en la población normal. Los AAE se presentaron en el 46,7 por ciento. El estudio estadístico de asociación se realizó mediante un análisis de modelos log lineales. CONCLUSIÓN: Existe asociación entre las variables motilidad y recuento de espermatozoides. (p<0,01) (AU)

Correlación entre glicolipidos ABH en espermatozoides y test funcionales / Correlation between ABH glycolipids in sperm and functional tests

OBJETIVO: El objetivo de este trabajo fue evaluar si existe asociación entre los tests de integridad de membrana espermática y la expresión normal o alterada de los glicoesfingolipidos ABH de la misma. MÉTODO: Se trabajó con un grupo de 50 hombres que consultaron por infertilidad en los laboratorios de Reproducción del Hospital Escuela Eva Perón de Granadero Baigorria y del Hospital Provincial del Centenario de la ciudad de Rosario (Rep, Argentina.) Las muestras de semen fueron recogidas y analizadas según normas OMS, en las cuales se observó el porcentaje de espermatozoides muertos mediante el test de eosina (TE) y el porcentaje de espermatozoides hinchados con el test hiposmótico (TH), siendo además clasificadas según su expresión ABH esté disminuida o ausente (grupo 1) o normal (grupo 2), aplicando la técnica de inhibición de la hemaglutinación y consumo del anticuerpo específico. Para el análisis estadístico se realizó la comparación de los dos grupos considerados respecto de ambos tests de viabilidad espermática, utilizando la técnica no paramétrica de Mann- Whitney para muestras independientes, por no cumplirse los supuestos para la aplicación. RESULTADOS: Se evidencian diferencias signifcativas en la variable porcentaje de muertos (TE) para los dos grupos (p< 0,001), no evidenciándose diferencia significativa en la variable I porcentaje de hinchados (TH) para ambos grupos. CONCLUSIÓN: En base a nuestros resultados y a los datos bibliográficos, concluimos que existe asociación entre expresión ABH disminuida e integridad de la membrana del espermatozoide, principalmente a nivel de la cabeza. Lo que nos lleva a pensar que los glicoesfingolipidos ABH, se localizan preferentemente en esta zona del espermatozoide, involucrada en la interacción con el ovocito (AU)

Deleción antigénica ABH en células de sedimento urinario de pacientes con adenoma de próstata / ABH antigenic deletion in cells of urinary sediment of patients with benign prostatic hyperplasia

El OBJETIVO de este trabajo fue estudiar la expresión de antígenos ABH en sedimento urinario de pacientes con adenoma de próstata antes y después de la desobstrucción quirúrgica. MÉTODO/RESULTADOS: Se aplicó la técnica de inhibición de la aglutinación para determinar la expresión de antígenos ABH en sedimento urinario en 30 sujetos sanos y 34 pacientes con hiperplasia prostática benigna. En estos últimos, también se investigó la presencia de células neoplásicas en sedimento urinario, por tinción con Papanicolau. Estos estudios se hicieron antes de la cirugía y se repitieron a los 12 meses posteriores a la misma. La expresión de los antígenos de membrana se observó en el 100 por ciento de la población normal y sólo en el 50 por ciento de los pacientes con adenoma de próstata antes de la cirugía. Luego de la cirugía sólo concurrieron al control 25 pacientes, de los cuales 17 continuaron con expresión positiva y de los 8 con resultados prequirúrgicos negativos, sólo uno permaneció como tal. Dicho paciente presentó una evolución maligna confirmada por los estudios de citología urinaria. CONCLUSIÓN: De acuerdo con los resultados obtenidos, se podría plantear la investigación de antígenos ABH, como estudio diagnóstico, complemetario a la citología, con capacidad de anticipar estados de premalignidad (AU)

Ventajas de un nuevo kit para la determinación de auto anticuerpos antiespermáticos / Advantages of a new kit for detection of sperm autoantibodies

OBJETIVO: Está ampliamente demostrado, que existe un vínculo importante entre la presencia de un nivel incrementado de anticuerpos antiespermatozoides (AAE) en hombres infértiles, comparado con hombres fértiles normales, sugiriendo ser ésta una posible causa de infertilidad. Se diseñó este estudio para correlacionar los métodos directos de aglutinación mixta TAC II (kit desarrollado y validado por nuestro equipo de trabajo ) con MAR-Screen (Fertility Technologies, Natick M.A, Bioscreen, Inc.) como métodos de screening. MÉTODOS: Se trabajó con 645 muestras de semen de pacientes que consultaron por infertilidad en los Servicios de Infertilidad y Urología de los Hospitales Provincial del Centenario y Eva Perón de Granadero Balgorria, ambos Hospitales Escuela de la Universidad Nacional de Rosario, Argentina y 30 controles fértiles. RESULTADOS: Los análisis estadísticos demostraron que TAC II tiene una sensibilidad del 87 por ciento y una especificidad del 100 por ciento. El valor predictivo positivo (VPP) hallado fue del 100 por ciento y el valor predictivo negativo (VPN) fue del 98 por ciento. CONCLUSIONES: Sugerimos el uso de TAC II, de similares características metodológicas a MAR- Screen, pero con ciertas ventajas, entre otras, la posibilidad de efectuar las pruebas con muestras congeladas y oligospérmicas, ya que no es necesario que los espermatozoides permanezcan móviles. Se garantiza una mayor especificidad inmunológica de la prueba al introducir el lavado de los espermatozoides (AU)

Glicosilación anormal de antígenos ABH solubles en patologías tumorales del tracto urinario / Abnormal glycosycosylation of soluble ABH antigens in tumors of the urinary tract

OBJETIVO: Investigar la expresión secretora en pacientes con cáncer de vejiga y adenoma de próstata respecto de la población normal. MÉTODO: Se determinó el carácter secretor en saliva de una población normal (n=40) y pacientes con cáncer de vejiga (n=61) y con adenoma de próstata (n=44) por la técnica de inhibición de la hamaglutinación. RESULTADOS: El 80 por ciento de la población normal resultó ser secretora, coincidente con la bibliografía. De los pacientes con cáncer de vejiga, sólo 23 casos (37,71 por ciento) resultaron ser secretores y 24 pacientes (54,54 por ciento) con adenoma de próstasta expresaron el gen secretor. Estos resultados nos indican una disminución en la expresión de antígenos solubles en los pacientes con adenoma de próstata o cáncer de vejiga, respecto de la población normal. En otros trabajos se ha demostrado la relación de antígenos ABH en la membrana de células tumorales. Esta falta de expresión resulta de una alteración genética en los clones involucrados en la patología tumoral. La disminución de antígenos solubles en la población estudiada, podría deberse al mismo mecanismo de alteración genética que alcanzaría tejidos no tumorales La mayoría de los cánceres humanos se originan a partir de células epiteliales y los cambios en los antígenos de grupo sanguíneos constituye un tópico importante en la inmunología tumoral (AU)